Recombinant expression and purification of the bovine acidic Seminal Fluid Protein

The acidic Seminal Fluid Protein (aSFP), a 12.9 kDa protein is a maker for bovine semen freezability possibly due to its antioxidant activity and effect on sperm mitochondrial function. However, its precise function on sperm preservation during freezing thaw is poorly understood. The use of recombinant DNA technology allows new approaches on the study of function and structure of proteins, and its production in procaryote systems offers several advantages. The present work describes the recombinant expression of the bovine aSFP and its binding properties. A cDNA library from the bovine seminal vesicle was used as template for amplification of the aSFP coding region. The amplicon was cloned into a pET23a (+) vector and transformed into E.coli BL21 pLysS strain. The recombinant expression was obtained in E coli. One step ion immobilized affinity chromatography was performed, resulting in high yield of purified protein. To determine the bioactivity of the r aSFP, the protein was incubated in different concentrations with 10 7 spermtozoa at 37°C for 5 h. Western blotting and fluorescence microscopy analyses showed the ability of the recombinant aSFP to attach to the spermatozoa. Based on our results, the described method can be used to obtain mg levels of recombinant aSFP.

Resposta reprodutiva de vacas de corte associada a marcadores moleculares relacionados à fertilidade / Reproductive performance of beef cattle cows associated with molecular markers related to the fertility

O objetivo deste estudo foi buscar associação entre a taxa de prenhez após inseminação e natalidade com marcadores moleculares ligados aos genes do receptor para IGF-1, LHβ, Leptina e receptores do FSH e LH. Utilizaram-se 249 vacas adultas Aberdeen Angus, das quais 199 foram submetidas a protocolos distintos para a IATF, seguida pelo repasse com touros, e 50 vacas formaram o grupo controle representado pelo acasalamento com touros. Foram avaliados o escore de condição corporal (ECC) e o escore de condição ovariana (ECO) ao início da estação reprodutiva. O ECC influenciou a taxa de natalidade, respectivamente de 55,6%, 75,8% e 82,4% (P<0,05) para os animais com ECC menor que 2,5, entre 2,5 a 2,9, e maior ou igual a 3,0, por ocasião da estação reprodutiva. Os marcadores relacionados ao gene do receptor para o IGF-1 (AFZ-1 e HEL5) mostraram associação com a taxa de natalidade. Vacas homozigóticas para o marcador AFZ-1 apresentaram 84,4% de natalidade em comparação às heterozigóticas, com 71,5% (P<0,05). A presença do alelo*161 para o marcador HEL5 foi negativa sobre a natalidade, respectivamente de 33,3% e 76,5% para vacas com e sem esse alelo (P<0,05). Esses resultados demonstram uma importante associação entre os marcadores envolvidos com o receptor para o IGF-1 e desempenho reprodutivo de vacas Angus.

The association between the reproductive performance, expressed by pregnancy rate at fixed timed artificial insemination and birth rate in the subsequent season in beef cows, and molecular markers linked to genes for IGF-1 receptor, LHβ, leptin, and FSH and LH receptors were evaluated. Data from 249 Aberdeen Angus adult cows were used in this study. One hundred and ninety-nine cows were subjected to four different protocols for FTAI, followed by clean-up bulls and 50 cows formed the control group, matted only with bulls for 90 days during the mating season. Body condition score (BCS) and ovarian condition score (OCE) were evaluated at the beginning of the breeding season. The birth rate in the following year was 75.5%, with no treatments influence. The BCS has influenced the birth rate, respectively 55.6%, 75.8% and 82.4% (P<0.05) for animals with BCS less than 2.5; 2.5 to 2.9; and greater than or equal to 3.0, at the beginning of the breeding season. The markers related to IGF-1 receptor gene (AFZ-1 and HEL5) were associated with the birth rate in beef cows. Cows homozygous for AFZ-1 marker showed 84.4% of birth rate, while heterozygous cows showed 71.5% (P <0.05). The presence of allele *161 to the HEL5 marker was negative on birth rate. Cows with this allele had only 33.3% of birth rate, while cows without this allele had 76.5% of birth rate (P <0.05). These results demonstrate a significant association between the markers involved with the IGF-1 receptor and reproductive performance of Aberdeen Angus beef cows.

Retardo da realização da IATF sobre o desempenho reprodutivo na estação de acasalamento de vacas de corte lactantes / Delay of beginning to FTAI on reproductive performance during to mating season of beef lactating cows

Compararam-se efeitos de diferentes protocolos para a IATF com o acasalamento natural (Controle) sobre o desempenho reprodutivo de 249 vacas Aberdeen Angus, distribuídas em cinco grupos: Controle (n=50); Crestar 2º uso (n=64); OvSynch (n=65); Primer 1ºuso (n=35) e Primer 2º uso (n=35). A IATF dos animais dos grupos Crestar 2º uso, OvSynch, e Primer 1º uso foi realizada 27 dias após o início da estação do grupo controle e a IATF do grupo Primer 2º uso ocorreu 38 dias após o início da estação do grupo-controle. A partir de sete dias após a IATF, os animais foram submetidos ao repasse por touros até o término da estação de acasalamento, que foi de 91 dias para o grupo-controle, 64 dias para os grupos Crestar 2º uso, OvSynch e Primer 1º uso e de 53 dias para o grupo Primer 2º uso. A taxa de gestação ao final da estação de acasalamento não se diferenciou entre os grupos (P>0,05), sendo de 85,9%; 83,1%; 82,9%; 88,6% e 80,0%, respectivamente, para Crestar 2º uso; OvSynch; Primer 1º uso; Primer 2º uso e Controle. A taxa de parição resultante da IATF foi de 23,4%; 29,2%; 48,6% e 62,9% para os grupos Crestar 2º uso, OvSynch, Primer 1º uso, Primer 2º uso, respectivamente, com diferença significativa (P<0,05) entre Crestar e Primer 1º e 2º uso. OvSynch não se diferenciou de Crestar e Primer 1º uso. Primer 1º uso não se diferenciou de Primer 2º uso. A perda gestacional, do diagnóstico de gestação ao nascimento, foi de 10,5%. O intervalo de partos estimado (IEP) não apresentou diferenças, com média de 478 dias. O escore de condição corporal (ECC) de fêmeas gestantes ao final da estação reprodutiva foi diferente do de fêmeas não gestantes (controle), mas não dos demais grupos, possivelmente pela influência do tratamento em induzir a ciclicidade dos animais com ECC inferior. O atraso da realização da IATF após 27 ou 38 dias do início da estação de acasalamento não afetou a taxa de gestação final e o IEP dos animais, quando comparado ao acasalamento por touros.

The effects of different FTAI protocols were compared to the natural mating of bulls on the reproductive performance of 249 Aberdeen Angus cows. Five groups were formed: Control (n=50); Crestar 2nd use (n=64); OvSynch (n=65); Primer 1st use (n=35) and Primer 2nd use (n=35). The FTAI of the animals in the Crestar 2nd use, OvSynch and Primer 1st use groups was accomplished 27 days after the beginning of the mating season for the control group and the FTAI in the Primer 2nd use group happened 38 days after the beginning of the mating season of the control group. From seven days after the FTAI cows were exposed to bulls until the end of the mating season. The mating season was of 91 days for the control group, 64 days for the Crestar 2nd use, OvSynch and Primer 1st use groups and 53 days for the Primer 2nd use group. The pregnancy rate at the end of the mating season didn't differ among the groups (P>0.05), being 85.9; 83.1; 82.9; 88.6 and 80.0% respectively, for Crestar 2nd use, OvSynch, Primer 1st use, Primer 2nd use and Control. The birth rate resulting from FTAI was 23.4; 29.2; 48.6 and 62.9% for the Crestar 2nd use, OvSynch, Primer 1st use, Primer 2nd use groups, with significant difference (P<0.05) among Crestar and Primer 1st and 2nd use. OvSynch didn't differ in Crestar and Primer 1st use. Primer 1st use didn't differ from Primer 2nd use. The average reproductive losses between the gestation diagnosis and the birth were10.5%. The estimated calving interval (CI) didn't present differences among the animal groups, with an average of 478 days. The body condition score (BCS) of pregnant cows at the end of the reproductive station differed from BCS of empty cows in the control group, but it didn't differ in the other groups, possibly due to the hormonal treatment influence in inducing the oestrus and ovulation in animals with lower BCS. The delay of the accomplishment of FTAI after 27 or 38 days of the beginning of the mating season didn't affect the final pregnancy rate and CI of the cows, when compared to natural mating.

Cerovsky: método alternativo para avaliaçäo morfológica de espermatozóides de eqüinos / Cerovsky: an alternative method for the morphological evaluation of equine spermatozoa

Foram corados 39 esfregaços de sêmen eqüino pelo método de Karras modificado e pelo método de Cerovsky. Os esfregaços foram examinados conforme preconizado por KRAUSE (1966), contando-se 200 células por lâmina. A qualidade de coloraçäo foi avaliada subjetivamente e classificada em escala de 0 a 4onde 0 corresponde à impossibilidade de leitura a 4 à ótima nitidez. Na interpretaçäo dos resultados näo foram observadas diferenças significativas (P>0,05) entre as duas técnicas. No entanto, quanto à qualidade do esfregaço, foram obtidos melhores resultados com Cerovsky. Com base nos dados obtidos conclui-se que o método de Cerovsky, além da rápida execuçäo, possibilita uma boa coloraçäo de acrossoma